Estudio de la expresion del gen fmr1 mediante su mensajeroanalisis de resultados en pacientes afectosy portadores del sindrome x fragil

Abstract

INTRODUCCION: El síndrome X Frágil (SXF) es la causa más común de retraso mental hereditario y una de las enfermedades genéticas más frecuentes. Históricamente el fenotipo clínico del SXF se había asociado a pacientes que presentan la mutación completa (MC) del gen FMR1, es decir una expansión anómala del triplete CGG por encima de 200 copias que conlleva la metilación de dicho gen y por tanto su inactivación con ausencia de la proteína que codifica. Los portadores de la premutación (PM), con un número de repeticiones CGG entre 60 y 200, eran asumidos como asintomáticos, sin metilación del gen y por tanto con transcripción normal y proteína. Sin embargo estudios recientes han demostrado la presencia de fenotipos clínicos característicos de la PM, que no acontecen en la MC y que incluyen fallo ovárico precoz (FOP) en mujeres, y el desarrollo -mayoritariamente en hombres- de un nuevo síndrome, Fragile X Tremor Ataxia Syndrome (FXTAS) en edad avanzada (Hagerman y cols., 2002). Así mismo se ha descrito la existencia de una desregulación de la expresión del gen FMR1 en este rango de la PM, con elevados niveles de ARNm respecto a la población normal, niveles que aumentarían linealmente conforme lo hace el número de CGGs (Tassone y cols., 2000a, Allen y cols., 2004, etc). También se han descrito casos en la literatura con MC en los que el gen no está metilado y presentan ciertos niveles de ARNm (Tassone y cols., 2000b), por lo que la existencia de un número de tripletes CGG por encima de las 200 copias no parece garantía de un silenciamiento transcripcional para la MC. OBJETIVOS: Analizar la expresión del gen FMR1, estudiando su ARNm en individuos de familias en las que se transmite el SXF, a fin de evidenciar la existencia o no de una alterada expresión del gen FMR1, relacionar ésta con los parámetros moleculares involucrados, y estudiar la influencia de los niveles de ARNm en el fenotipo de los portadores de la PM. METODOLOGÍA: Para cuantificar la expresión del gen FMR1 se ha puesto a punto la técnica de la PCR a tiempo real, que permite cuantificar el ADNcopia obtenido por retrotranscripción a partir del ARNm. Este proceso de amplificación combina un sistema de detección por fluorescencia y refleja una relación lineal entre el incremento de fluorescencia y un valor umbral, que permite cuantificar la expresión génica. RESULTADOS Y CONCLUSIONES: La técnica por PCR cuantitativa a tiempo real ha resultado válida para analizar la expresión del gen FMR1 mediante el estudio de su ARNm, obteniendo una sensibilidad y fiabilidad del 100% en los varones con MC y logrando resultados lineales y reproducibles, tanto en población masculina como femenina. En ambas poblaciones y tanto en la MC como en la PM, existe una desregulación transcripcional y hemos demostrado una relación no lineal de los niveles de ARNm con el número de tripletes CGG en individuos con PM. Finalmente, no hemos hallado relación entre los niveles de ARNm y el FOP o el CI en mujeres con PM, pero sí un posible efecto intrafamiliar.