Regulacion funcional del supresor tumoral ptenestudio inmunologico y mutacional

Resumen

En la presente tesis, se estudia la regulación de uno de los supresores tumorales más importantes en humanos, la fosfatasa de lípidos PTEN. Para ello, en primer lugar se generaron y caracterizaron anticuerpos monoclonales específicos frente a distintas regiones de la proteína, que han seNido como herramientas para los estudios posteriores. Con dichos anticuerpos, se estudió la regulación de la proteólisis parcial de PTEN por caspasa-3. Se concluyó que dicha proteólisis se favorece por la actividad fosfatasa de lípidos de PTEN, mientras que se ve dificultada por su actividad fosfatasa de proteínas. También se comprobó que los anticuerpos frente al extremo C-terminal de PTEN pueden ser utilizados para inhibir la unión de éste a dominios PDZ. Asimismo, se realizó un escrutinio de interacciones de PTEN con otras proteínas en una línea celular de cáncer de mama (MCF-7). Se estudió la regulación de la localización subcelular de PTEN por otro supresor tumoral, el inhibidor de CDKs p27. Formas de PTEN de localización nuclear son retenidas en el citosol por p27. Finalmente, se realizó un estudio de la ruta PI3K/PTEN/Akt utilizando como organismo modelo la levadura Saccharomyces cerevisiae. Nuestros resultados indican que el fenotipo obseNado en la levadura depende de las subunidades catalíticas y reguladoras de PI3K expresadas, de la actividad catalítica de los mutantes de PTEN expresados (catálisis intrínseca y catálisis in vivo) y de su nivel de expresión. Los resultados obtenidos en el sistema de la levadura reflejan lo que podría ocurrir en células de mamífero. Debido a la simplicidad del sistema, éste podría ser empleado para estudios de alteraciones en varios punto de la ruta PI3K/PTEN/Akt de mamíferos, y para estudios funcionales de alto rendimiento, como el escrutinio de inhibidores químicos de p11 Oa o de moduladores de PTEN.