Localización y caracterización de la apoptosis en el oído interno de la rata sprague-dawley en un modelo experimental de ototoxicidad por cisplatino

Resumen

La ototoxicidad se defina como la alteración de la audición o el equilibrio producida por la exposición a sustancias tóxicas o tratamientos farmacológicos, siendo el cisplatino un fármaco con potencial anticanceroso y el más estudiado de los medicamentos con potencial ototóxico. Desde hace años el modelo de ototoxicidad por cisplatino ha servido para conocer en profundidad la fisiopatología de las hipoacusias de cualquier etiología y ha servido para entender el funcionamiento de las células del oído interno. En esta tesis, basándose en los hallazgos obtenidos mediante la expresión de distintas proteínas, con métodos cuantitativos y morfológicos hemos definido las vías de producción de la ototoxicidad mediante apoptosis, en que células del oído interno tiene comienzo el desarrollo los procesos tóxicos y hemos estudiado proteínas que influyen y pueden actuar como marcadores en la ototoxicidad por cisplatino. Material y métodos: Estudio auditivo mediante potenciales evocados auditivos de tronco cerebral bajo anestesia general con diacepam y ketamina Caracterización de la apoptosis mediante western-blot para proteínas apoptóticas (caspasas-3-7, 8 y 9, bax, bcl-2), para proteínas relacionadas con daño tisular (Superóxido dismutasa, HSP-70, ATP), Localización de fenómenos apoptóticos mediante inmunohistoquímica para la detección de HSP-70 y proteína activa de la caspasa-3. Inhibición de la apoptosis mediante el uso de inhibidores específicos de caspasas (Z-DEVD-FMK y Z-LEHD-FMK). Sección experimental 1: Definir el papel de las células de soporte en distintos procesos fisiopatológicos del oído interno. 2: Caracterizar las vías de activación de la apoptosis en la ototoxicidad por cisplatino. 3: Inhibición de la apoptosis mediante aplicación de inhibidores de apoptosis (inhibidores de caspasas). 3: La proteína del choque térmico 70 como marcador serológico de ototoxicidad. 5: La proteína del choque térmico 70 como regulador de la apoptosis en el oído interno. Conclusiones: 1.-El cisplatino administrado en dosis subletales de 5 mg/kg produce en la rata Sprague Dawley una pérdida auditiva de carácter neurosensorial, demostrable mediante la realización de potenciales evocados auditivos de tronco cerebral, y constituye un modelo experimental válido para el estudio de la ototoxicidad por agentes platinados. 2.-La vía intrínseca de la apoptosis es la responsable de la muerte celular en el oído interno de la rata Sprague Dawley en un modelo experimental de ototoxicidad por cisplatino. 3.-La disfunción auditiva provocada por la administración de cisplatino está en relación con la alteración de la función de las células de soporte y de las células de la pared lateral del órgano de Corti, como paso previo a la apoptosis de las células ciliadas. 4.-La proteína del choque térmico 70 es un marcador precoz inespecífico de daño celular mediado por cisplatino, La regulación de la expresión de esta proteína puede modificar los mecanismos de producción de la apoptosis en el oído interno. 5. -La utilización de inhibidores de las caspasas electoras, administrados por vía sistémica, protege la audición e inhibe la apoptosis de los distintos tipos celulares del oído interno de la rata Sprague Dawley.