Estudio y caracterización del proceso apoptótico inducido por n(4 hidroxifenil) retinamida en células humanas de leucemia linfoblastica aguda, activación de la vía mitocondrial mediada por estrés oxidativo

Résumé

Los retinoides constituyen una familia de moléculas capaces de regular importantes funciones celulares. La capacidad de estos agentes para inhibir la proliferación e inducir diferenciación y apoptosis en células malignas les confiere un gran potencial como agentes terapéuticos. Entre éstos la retinamida sobresale como uno de los candidatos más interesantes; se ha demostrado su efecto antineoplásico y quimiopreventivo tanto in vitro como en modelos animales y además, muestra una baja toxicidad en los ensayos clínicos llevados a cabo. En el presente trabajo demostramos que los tratamientos in vitro con el retinoide sintético 4-HPR, inducen un proceso de muerte celular por apoptosis en líneas celulares humanas de leucemia linfoblástica aguda CCRF-CEM y JURKAT, pero no así en linfocitos de sangre periférica. Asimismo, hemos establecido una secuencia de acontecimientos que se activan y llevan a término este proceso. De este modo hemos descrito que la retinamida causa un incremento de la concentración intracelular de ceramida activando tanto la hidrólisis de esfingomielina como la síntesis de novo. Mediante inhibidores específicos hemos demostrado que la ceramida es la principal responsable de provocar un estrés oxidativo, el cual a su vez desencadena la apoptosis activando la ruta mitocondrial. Concretamente, los ROS se originan en la cadena respiratoria mitocondrial, en un paso posterior al complejo I y II y anterior al paso de los electrones entre la ubisemiquinona y ubiquinona en el complejo III; los ROS provocan la perioxidación de cardiolipina, la activación de las proteínas proapoptóticas Bak y Bax, la disipación del DYm y en definitiva la permeabilización mitocondrial con la consiguiente liberación al citosol del citocromo c, AIF y Ca2+. La liberación de estos factores se asocia a la activación de la caspasa-3 y la degradación del DNA dependiente de caspasas. La proteína Bcl-2 regula los acontecimi