Heterogeneity and clonality among isolates of mycobacterium kansasiiepidemiológical study in Biscay, Basque Country, Spain

Résumé

La notificación de un incremento de los aislamientos de M Kansasii en Vizcaya en los últimos cinco años, nos planteó la realización de un estudio epidemiológico cuyo objetivo fundamental sería conocer las implicaciones epidemiológicas de los aislamientos de M Kansaii mediante el desarrollo de técnicas de Biología Molecular. Mediante PCR-RFLP 293 aislamientos clínicos (98,9%) pertenecían al genotipo I, además la cepa de control CECT 3030T y una cepa escotocromógena de M. Kansasii (Sco-I). Unicamente 3 aislamientos clínicos generaron el genotipo II. Las tres capas pertenecían a dos varones que vivían en el mismo área (Barakaldo). Mediante RAPD los mejores resultados los obtuvimos combinando los iniciadores MPTR-1 e INS-2 generando seis clones: Al por 215 aislamientos clínicos (73.3%), B1 por 70 aislamientos (23.8%), A2 por 4 aislamiento, A3 por 1 aislamiento, D1 por 3 aislamiento del genotipo II, y C1- por una cepas control (Pas-1). El análisis mediante AFLP generó los mejores resultado con el enzima ApaI y con la combinación de 3 iniciadores Apa -A, Apa-C, y Apa-T. Con los aislamientos clínicos se generaron 10 clones: 1º: con 139 aislamientos clínicos (47.4%), 2º con 71 (24.2%), el 3º con 61 (20.8%),el 4º 13 (4.4%), el 5º 2 (0.06%), 6º,7º,8º y 9º con un aislamiento clínico cada uno y el 10º formado por los aislamientos pertenecientes al genotipo II. Además se generaron otros 3 clones con cepas eoidemiologicamente no relacionadas: (Sco-I, Pas-1 y CECT 3030T). Mediante LRF-PFGE se estudiaron 43 aislamientos clínicos pertenecientes a todos los clones obtenidos mediante AFLP. Los resultados mejores se obtuvieron con el uso del enzima Dral y se obtuvieron un total de 11 clones, se generaron otros 3 clones mas con cepas control usadas. La investigación en las muestras de agua ambientales, laboratorio de microbiología y agua de domicilios de pacientes no generó aislamientos de M. Kansasii, except