Design of a non-viral vector based on solid lipid nanoparticles for the treatment of fabry disease

Resumen

El objetivo de esta tesis ha sido el desarrollo de un vector no viral basado en Nanopartículas Sólidas Lipídicas (SLN) para el tratamiento de la enfermedad de Fabry mediante terapia génica.Inicialmente, se estudiaron vectores conteniendo el plásmido que codifica para la ¿-Galactosidasa A, enzima deficiente en la enfermedad de Fabry, y basados en SLN y protamina o dextrano y protamina en células hepáticas humanas (HepG2). Este estudio demostró por primera vez un aumento de hasta 12 veces en la producción de la ¿-Galactosidasa A mediante la utilización de vectores no virales en células HepG2. Además, se observó que el porcentaje de células transfectadas no era proporcional a la cantidad de proteína sintetizada, debido al efecto de la protamina en la transcripción, así como por la presencia de señales de localización nuclear en este compuesto.Estos estudios se trasladaron posteriormente a un modelo celular de la enfermedad de Fabry, las células IMFE1. En estas células en las que la producción de ¿-Galactosidasa A está disminuida, se consiguió aumentar hasta 4 veces la producción de la misma. Los resultados más altos se obtuvieron con vectores basados en SLN que contenían ácido hialurónico y protamina.Finalmente, se analizaron los posibles mecanismos de entrada de 3 de los vectores no virales. Para ello se utilizaron inhibidores de la endocitosis en células HeLa, en los que estaban presenten gran parte de los mecanismos utilizados por las formulaciones basadas en SLN. Tras este estudio se determinó que los vectores DNA-SLN eran capaces de utilizar múltiples vías. Sin embargo, las formulaciones que contienen protamina no necesitan las vías dependientes de dinamina para transfectar las células. Además, la potenciación de la macropinocitosis resulta en un aumento de la transfección con vectores que contienen dextrano. A falta de una confirmación en un modelo animal de la enfermedad, estos resultados avalarían la capacidad de los vectores no virales basados en SLN como futura alternativa en el tratamiento de la enfermedad de Fabry.