Diagnóstico molecular por reacción en cadena de la polimerasa del síndrome X frágil: aplicación de un protocolo diagnóstico en 50 familias del norte de España
- M. Durán Domínguez
- M. Molina Carrillo
- J. Fernández Toral
- T. Martínez Merino
- M.aA. López Arístegui
- A.I. Álvarez Retuerto
- M.aL. Onaindía Urquijo
- M.aI. Tejada Mínguez
Argitalpen urtea: 2001
Alea: 54
Zenbakia: 4
Orrialdeak: 331-339
Mota: Artikulua
Garapen Iraunkorreko Helburuak
Laburpena
Objetivos Poner a punto una metodología rápida y eficaz para el diagnóstico molecular del síndrome X frágil (SXF), mediante técnicas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) del triplete CGG, y establecer así un protocolo que nos sirva para: a) descartar el síndrome en pacientes con retraso mental no clasificado; b)averiguar el genotipo exacto de los individuos afectados; c)estudiar todos los individuos en riesgo de las familias con síndrome X frágil y encontrar los portadores asintomáticos, y d) proporcionar así el adecuado asesoramiento genético y reproductor a las familias en las que se transmita el síndrome. Pacientes y métodos Se estudiaron 438 muestras de individuos de 50 familias con síndrome X frágil. Se utilizaron tres protocolos de PCR, uno para detección con bromuro de etidio y luz ultravioleta; el segundo para detección con digoxigenina y el sustrato quimioluminiscente (CSPD), trasblotting e hibridación con la oligosonda (CGG)5; el tercero para amplificar y detectar de forma parecida el microsatélite DXS 548. Resultados Se encontraron 121 individuos con la mutación completa (60 varones y 61 mujeres); 86 premutados (7 varones y 79 mujeres); 16 mosaicos y 215 normales. La PCR ampli-ficó hasta 120-150 repeticiones, y fue necesario el estudio directo con sonda en el caso de ausencia de banda o banda única en mujeres. La PCR resultó más precisa que el Southern-blot de ADN genómico en los portadores premutados. Finalmente, se halló en una familia recombinación entre el locusFRAXA y el microsatélite DXS 548. Conclusiones Estos protocolos de PCR no radiactiva permiten el diag-nóstico rápido y seguro del síndrome X frágil, y están especialmente indicados en posibles portadoras y para establecer el diagnóstico prenatal.